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原代心肌細(xì)胞間的培養(yǎng)是為了什么?

更新時間:2022-01-11點擊次數(shù):1876
  原代心肌細(xì)胞間作為主要研究模型廣泛應(yīng)用于心血管研究,經(jīng)過長期的嘗試,我們實驗室找到了一些行之有效的方法,積累了一些經(jīng)驗??偨Y(jié)如下:
  1、細(xì)胞分散和接種均勻度
  分離出來的心肌細(xì)胞在溶液中Ca2+的作用下容易結(jié)塊,因此,在差動貼壁前后,應(yīng)將心肌細(xì)胞輕輕吹吹多次,形成單一分散狀態(tài)。接種后,心肌細(xì)胞應(yīng)均勻分布在培養(yǎng)板上避免細(xì)胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外,將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后,用滴管輕輕吹每個孔中心部分2~3次,但要特別注意避免污染。

 

原代心肌細(xì)胞間
 

 

  2、成纖維細(xì)胞的抑制和血清類型的選擇
  成纖維細(xì)胞比原代心肌細(xì)胞間更容易貼壁,具有分裂和增殖的能力。差異粘附后,少量成纖維細(xì)胞仍混合在心肌細(xì)胞中。如果處理不當(dāng),它們很容易長成優(yōu)勢細(xì)胞溴脫氧尿苷(BrdU)會干擾細(xì)胞有絲分裂,因此BrdU通常用于抑制成纖維細(xì)胞的生長,但如果使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,則很難BrdU*抑制成纖維細(xì)胞的生長,因為胎牛血清中含有許多促有絲分裂因子,使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象,獲得90%以上的心肌細(xì)胞。
  3、換液時間
  觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時,接種密度低,貼壁心肌細(xì)胞數(shù)減少。為避免因更換溶液而丟棄有活力的心肌細(xì)胞,接種后48小時應(yīng)更換溶液,這樣不僅貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量明顯增加,而且BrdU的作用時間更長,對成纖維細(xì)胞的抑制作用更明確此外,其與0.1g?L1BSA對心肌細(xì)胞黏附率和凋亡率無顯著影響。
  4、防污染措施
  除無菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外,還應(yīng)特別注意以下幾點:(1)取心時避免切開消化道較安全的方法是切入劍突上肋,不涉及腹腔,減少污染機(jī)會(2)條件允許的情況下,新生大鼠心肌細(xì)胞不應(yīng)與其他細(xì)胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng),以防止交叉污染(3)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的觀察和拍照每次時間過長,否則不僅會改變培養(yǎng)基的pH值,還會增加污染的概率。
 
 
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